DNA测序有哪些方法?
1、Sanger 测序,用链终止法和毛细管电泳,这个是第一代测序的主要方法,至今仍然在使用。边合成边测序:454和Illumina测序都采用的这种方法,不过,有一些区别。
2、第一代DNA测序:双脱氧终止法 即sanger测序法。Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,并且在每个碱基后面进行荧光标记,产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得可见的DNA碱基序列。
3、Sanger双脱氧终止法——基本原理:以待测序的DNA作为模板,在DNApol的作用下可进行DNA复制,如果在反应体系中添加双脱氧底物,则DNA复制可能发生定点随机终止,即在确定的位点随机终止复制,对这些复制的产物进行电泳可根据片断大小与末端的碱基依次排列最终得到模板DNA的序列。
易基因|全基因组DNA甲基化测序分析全流程
1、全基因组甲基化测序利用重亚硫酸盐能够将未甲基化的胞嘧啶(C)转化为胸腺嘧啶 (T)的特性,将基因组用重亚硫酸盐处理后测序,即可根据单个 C 位点上未转化为 C 未转化为 T 的 reads 数目与所有覆盖的 reads 数目的比例,计算得到甲基化率。
2、首先按照比对的基因组坐标进行排序 去除多重比对、重复、未比对上的reads 最后就得到了排序且去重的BAM文件了 提取甲基化信息 至此,所有CpG位点就全部被提取出来了。将CpG位点保存为 GR 文件 由于测序是区分正负链的,而在分析的时候不区分,所以需要合并正负链的信息。
3、MSAP是利用对DNA甲基化敏感的两种同裂酶Hpa II和Msp I来对基因组DNA进行酶切和连接。由于两种酶能够识别相同的限制性酶切位点,即CCGG位点。当DNA序列中的CCGG位点出现不同程度的甲基化状态时,会分别被这两种酶识别,以有无产物的方式体现出来。
4、DNA的甲基化是在DNA的序列不变的条件下,在其中某些碱基上加上甲基的这样一个过程。一般是使甲基化位点的下游的基因表达量变少 甲基化和差甲化的C碱基都不能被转化成U碱基 氧化 用高钌酸钾氧化的方法来氧化羟甲基化的C,其转化效率是94%左右。用糖基把羟甲基化的C给保护起来。
基因检测的原理?
1、基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术,是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测,分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法。基因检测可以诊断疾病,也可以用于疾病风险的预测。
2、由此可见,进行基因检测有两个必要条件,一是必需的特异的DNA探针;二是必需的基因组DNA。当两者都变性呈单链状态时,就能进行分子杂交。基因探针基因探针(probe)就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
3、基因检测的基本原理是运用现代分子生物学和分子遗传学检查基因的结构及其表达功能是否正常。基因检测的途径主要有基因突变的检测、基因连锁分析和mRNA检测。最常用的技术有PCR扩增技术,DNA测序技术,生物芯片技术。基因检测主要是在传染性疾病,遗传性疾病,肿瘤中有重要的应用。
4、原理是DNA遇二苯胺试剂在水浴加热的条件呈蓝色。
5、基因检测是可以检测皮肤的。要想弄清楚皮肤基因检测的原理,首先要了解基因的作用,基因就藏在我们细胞的DNA中,每个人的长相、身体特质、皮肤特质等都是由自身基因决定的。
6、基因检测的取样主要有两大方式,取静脉血或刮取口腔黏膜上皮。虽然口腔黏膜上皮法为无创伤取样,容易被大众所接受,但提取静脉血DNA进行检测的经典方法,有其不可替代的优势。首先,这种方法可以保证DNA的洁净,不会出现外源DNA污染的现象(例如来自食物或口腔细菌)。
DNA质量检测相关方法,及效果
1、DNA质量检测的方法有:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。检测的效果分析如下:当OD260/OD280 8,表示蛋白质含量较高;当OD260/OD280 0,表示RNA含量较高;当OD260/OD280=8~0,表示DNA较纯。
2、对于基因组DNA质量检测主要包括:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。
3、第一种方法是测量260/280的比例,判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在75-80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚,高于此值表明有RNA的残留。第二种方法是凝胶电泳分析,看有无断裂降解。
4、LUMA: 利用HpaII和MspI酶的独特特性,对CpG甲基化状态进行精细测量,但对DNA质量要求高,需配合焦磷酸测序仪。
怎样对基因组DNA质量检测
对于基因组DNA质量检测主要包括:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。
DNA质量检测的方法有:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。检测的效果分析如下:当OD260/OD280 8,表示蛋白质含量较高;当OD260/OD280 0,表示RNA含量较高;当OD260/OD280=8~0,表示DNA较纯。
其测序原理是基于DNA杂交原理,利用目标基因组区域定制的探针与基因组DNA进行芯片杂交或溶液杂交,将目标基因区域DNA富集,再通过NGS技术进行测序。
第一种方法是测量260/280的比例,判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在75-80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚,高于此值表明有RNA的残留。第二种方法是凝胶电泳分析,看有无断裂降解。
向上清液中加1/10体积的3M NaAC (pH2),等体积的冷异丙醇,小心混匀。12000rpm离心10min,弃上清。(8)用70%乙醇洗涤沉淀一次,12000rpm离心,弃上清。(10)将沉淀在超净工作台上吹干,加50μl TE (pH0)室温溶解。电泳检测或用紫外分光光度计检测DNA的浓度和质量。