标记基因的分类及其作用(抗性基因和标记基因的区别)
标记基因有哪些种类。标记基因的作用。标记基因的主要作用。常用标记基因。标记基因标记基因原本是基因工程的专属名词,但是现在它已经成为一种基本的实验工具,广泛应用于分子生物学、细胞生物学、发育生物学等方面的研究。
标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标记,通常用来检验转化成功与否;在基因定位意义上来说,它是对目的基因进行标志的工具,通常用来检测目的基因在细胞中的定位。而 抗性基因是抗性的遗传因子。
标记基因是可用来删选克隆的标志,抗性基因可以作为标记基因。标记基因包含选择基因和报告基因,抗性基因是选择基因的一种,所以属于标记基因。基因工程中用于选择的抗性基因一般在载体上。
载体上抗性基因的存在有利于对目的基因是否表达进行检测?
抗性基因表达完全不代表目的基因表达与否,所以抗性基因不能作为检测目的基因的手段。抗性基因的作用在于筛眩因为只有目的载体上有目的基因和抗性基因,所以推论就是具有抗性的菌上“含有”目的基因,而没有目的基因的菌就因为没有抗性而死亡,不会影响结果。
不对,抗性基因是标记基因,是为了检测并筛选出载体有导入受体的细胞用的,它不会影响目的基因的表达。
【答案】:D 【答案】D。解析:载体上的抗性基因主要起着标记基因的作用,有利于筛选含重组DNA的细胞,并不能促进目的基因的表达。
基因工程是否成功就是看基因能否被成功表达,如果把表达载体用带有荧光或放射性的元素标记上,那么表达载体一旦被发现,就表明基因能成功转录翻译。
宝藏!转基因株系检测的N种方法
1、荧光定量PCR,如Taqman探针法和SYBR Green I法,不仅用于相对表达的定量,还能进行绝对拷贝数鉴定和基因型识别,是检测的黄金标准。图1-5犹如解码器,展示了PCR体系的运作,以及qRT-PCR和Western blot的直观演示。
2、日常使用浸花法(floral dip method)(Clough等,1998)转化拟南芥。将拟南芥的花序放到含有农杆菌的转化介质中浸泡3~5分钟,在转化介质的帮助下,农杆菌可以穿过植物细胞壁和质膜,侵染雌配子体即胚囊,并将带有目的基因和元件的T-DNA片段整合到雌配子的基因组上(Desfeux等,2000; Bent A, 2006)。
3、转化:利用农杆菌介导转化或基因枪等方法,将含有目标基因的载体导入大白菜的叶片、组织或胚胎。 再生:利用植物组织培养技术,培养转基因组织并再生成整株植物。 基因表达和筛选:通过分子生物学技术,如PCR、Western blot等,检测转基因大白菜中目标基因的表达和存在。
4、一对是内源基因的特异性引物,一对外源基因的特异性引物。这样你分别用不同的引物做RT-PCR就知道是内源或者外源基因表达了。而且你还可以进行表达量的半定量分析。
5、只要一部分序列就可以了。这样你在设计引物的时候,将内源基因和外源转入基因进行比对,选取二者特异性的区域设计两对引物。一对是内源基因的特异性引物,一对外源基因的特异性引物。这样你分别用不同的引物做RT-PCR就知道是内源或者外源基因表达了。而且你还可以进行表达量的半定量分析。
6、植物转基因技术是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因,通过各种方法转移到植物的基因组中,使之稳定遗传并赋予植物新的农艺性状,如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。随着现代生物技术的迅速发展,植物转基因技术方兴未艾。自从1983年首次获得转基因植物后,至今已有35科120多种植物转基因获得成功。
抗性基因或标记基因在质粒上的话,它怎么起到检验目的基因的作用?
抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中。如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化(因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的),只有转入了该质粒的菌才能长起来,也就意味着这菌是带有你的目的基因。
如果是做基因克隆的话,可以直接用蓝(兰)白斑筛选。一般的克隆载体上有Lac Z基因,在IPTG和X-gal作用下能产生蓝斑,而此基因中间有多克隆位点,当你的片段基因插入时,把这个基因给破坏了,不能产生兰斑,而只是产生白斑。这样就区别开来,象PUC18/19,PBR322等最常用的质粒都有Lac Z基因。
标志基因一般是某种药物的抗性基因,如抗青霉素基因等。筛选时向培养基内加入该抗性基因抗的物质,则目的基因已注入受体细胞的细胞表达该抗性基因,不会死亡,而为注入基因的细胞则因为药物而死。
抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.以卡那霉素抗性基因Kanr为例,Kanr编码蛋白APH(3′)-Ⅱ对卡那霉素具有抗性,这样在筛选培养基上添加卡那霉素,能够存活下来的就是具有卡那霉素抗性基因的质粒。